第二生化マニュアル目次
第二生化ではＨＰＬＣは通常、アラキドン酸代謝物の定量、ペプチドの分取に、ＦＰＬＣは通常、蛋白質の精製に用いられる。両者共に、紫外吸収をもって物質の溶出を検出するが、ＨＰＬＣでは吸収波長が変えられるのに対して、ＦＰＬＣは280nmに固定されているのが特徴である。両者ともに２台のポンプを持ち、これらからの流量をコントロールすることによって、塩や有機溶媒の傾斜（グラジエント）を付けることができる。ポンプから送り出された液はミキサーで混合され、カラムに入る。この段階がもっとも圧力のかかる場所であり、トラブルの多い場所である。カラムの許容圧を越えて使用すると、カラム、ポンプの劣化を招くのみならず、目的とする物質の分離が不良となる。特にFPLCでこのトラブルが多く見受けられる。これを避けるためには、
＊ソルベントは必ず、0.22 μmのフィルターを通したものを使用する。
＊サンプルは遠心するだけではなく、最低で0.44 μm、できれば0.22 μmのフィ ルターを通してInjectする。
＊毎回、圧をチェックし、記録しておく。
＊FPLCの吸着カラムは毎回使用者が責任をもって洗う。（洗い方は各カラム の説明書を参考のこと。
また、FPLC、HPLCに共通した注意点としては、
＊使用する30分位前にランプのスイッチを入れておく。(warm up)
＊使用後は忘れずにランプのスイッチを切る。（ランプには寿命があります）
＊使用後の後片付けをきちんと行う。特に塩類、有機溶媒の漏れはきちんと拭いておく。
サンプル、チューブ、シリンジ、溶液ビンを片付ける。
(コメント）
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