Capillary Electrophoresis(Beckman P/ACE 5010)の使い方
第二生化マニュアル目次
[1.] (使用前に)VIALの上下や動作はN2ﾎﾞﾝﾍﾞの圧力で行っているので、ﾎﾞﾝﾍﾞの圧が下がっていないことを確認する(5.5kgf/cm^2以上)。また、ﾌﾛﾝで冷却しているので、冷却用のﾎﾞﾄﾙにﾌﾛﾝ液が無くなっている時は補充する。
[2.] (capillaryが詰まっていた時は)詰まったcapillaryをcartridgeから外し、新しいcapillaryをcartridgeに入れ直すことから始まる。次にcartridgeを本体にｾｯﾄするときに軽く引っ掛かる場合は、一度戻してから再びゆっくりと差し込む(そのまま差し込むとcapillaryの先端が折れてしまうので抵抗が無いことを確認する)。そしてUV
Detectorをｾｯﾄする(RS-232ﾎﾟｰﾄの位置合わせを行う事)。
[3.] 機械をたちあげる(PACE 5010→Compaq System Goldの順で電源を入れる)。機械を立ちあげると最初はSystemの設定の画面になる(図１)。
System 1は左側のHPLC、System 2が右のCapillary Electrophoresisの機械である。電源が入っていないときは何も表示されない。
System2のｱｲｺﾝ(機械の絵)をﾏｳｽで左ﾎﾞﾀﾝでclickして次の画面でOKをｸﾘｯｸする。
System2のうちＡがUV-Detecter、Ｂが本体(CE-BASE)である。
設定が終わればﾏｳｽの右ﾎﾞﾀﾝを押せば普段使うｸﾛﾏﾄｸﾞﾗﾌの画面になる(図２)。
[4.] <Display>→<Display Scale>で必要なら表示画面の切り替えを行える。
<Display>→<Display Scale>で画面のｸﾛﾏﾄｸﾞﾗﾑのｽｹｰﾙの変更も行える。
[5.] <System 2>→<Direct Control>→<UV>→<OK>で画面をUV-detectorのｺﾝﾄﾛｰﾙ画面に変更してUV
lamp→onにする(図３、図４)。その後warm up状態になり、その後 5分ほどでonになるのでこの後波長の設定、次にBaselineの<AUTO
ZERO>を押してCalibrationを行う。
もしlampの寿命がきていれば<AUTO ZERO>を押してもCalibrationをが出来なくなるそうである。この後UV-detectorが安定するまでしばらくに時間がかかるので、それまでにMethod,Sample
tableを完成させる。
UV-detectorのｺﾝﾄﾛｰﾙ画面からﾏｳｽの右ﾎﾞﾀﾝを押せば再びｸﾛﾏﾄｸﾞﾗﾌの画面に戻る。
また、<System2>→<Direct Control>→<BASE>→<OK>をﾏｳｽでｸﾘｯｸしてゆけば画面を本体のｺﾝﾄﾛｰﾙ画面に変更できる(図５)。ここではﾘﾝｽ、ｶｰﾄﾘｯｼﾞの上下等が行える。この画面からﾏｳｽの右ﾎﾞﾀﾝを押せば再びｸﾛﾏﾄｸﾞﾗﾌの画面に戻る。
[6.] 機械を動かそうとするとerror message_17(no cartridge)が出る時があるが、それは普段はcapillary
cartridgeを押さえるhingeの部分の調子が悪いためで、支点の部位を上方に押さえながら[remove cartridge]ｽｲｯﾁを押すとようやく認識するようになる。
またerror message_14,15が出てVIALの上下さえも出来ない場合にはN2ﾎﾞﾝﾍﾞの圧が下がっているかﾋｭｰｽﾞが切れていることがあるので、ｶﾞｽﾎﾞﾝﾍﾞの圧を確認して問題無ければBeckmanに連絡し修理を依頼する。
[7.] 本体部分、capillary cartridge部分には冷却を行うためにﾌﾛﾝが流されているので、cartridgeを一度外したい場合には[remove
cartridge]ﾎﾟﾀﾝを押せば30sec.数える間にﾌﾛﾝがﾎﾞﾄﾙに戻されるのでcartridgeを外せるようになる。外せる状態になれば本体の[remove
cartridge]ﾎﾞﾀﾝのﾀﾞｲｵｰﾄﾞlampが点灯しているはずである。
再び[remove cartridge]を押せばﾌﾟｼｭｰｯという音がしてﾌﾛﾝが流れ始めるのでassay出来るようになる。この状態では[remove
cartridge]ﾎﾞﾀﾝのﾀﾞｲｵｰﾄﾞは消えている。
[8.] VIALをセットする(上部のｽﾘｯﾄに歪みが無いように。もしｽﾘｯﾄに歪みがあるとcapillary tubeが引っ掛かって折れることがある！)。
buffer液等はbottleの肩まで入れる。
また、inとoutでVIAL HOLDERの形状が違うので間違えないように。
ﾋﾞﾝ番号1-9がOUTLETのbufferのﾋﾞﾝ番号、10が排液のﾋﾞﾝ番号であるそうだ。
番号11-20はINLETのbuffer、21-30はｻﾝﾌﾟﾙ、31-33はwashの為の番号であるそうだ。
[9.] ｻﾝﾌﾟﾙをセットする。ｻﾝﾌﾟﾙ用のvialには２種類
１．micro vial(最低５μｌ+inject volume、ｾｯﾄ時にはｽﾌﾟﾘﾝｸﾞを併用) と
２．minivial(最低２０μｌ+inject volume) があり、
用途に応じて使い分ける。
また、特にmicro vialでは一番底に空気が残り、そのまま使用するとcapillary tubeにairが入ってしまうので、底を叩いて空気をしっかり抜く。ｻﾝﾌﾟﾙを全部入れてから空気を抜こうとするとｻﾝﾌﾟﾙが飛び散ってしまうので、最初に少量入れて底部の空気を抜いてから残りのｻﾝﾌﾟﾙを入れるとよいようだ。
[10.] (EDIT METHOD)ﾒｿｯﾄﾞを作るかまたは以前のﾒｿｯﾄﾞを確認する。
ﾒｿｯﾄﾞを探すにはｸﾛﾏﾄｸﾞﾗﾌの画面(図２)から、<System2>→<Edit Method>でﾒｿｯﾄﾞ編集の画面(図６)にして、更にEDIT
METHODの空白欄を左ﾎﾞﾀﾝでｸﾘｯｸすれば、ﾒｿｯﾄﾞﾌｧｲﾙを探す画面になる(図７)。この画面で使用又は変更したいﾌｧｲﾙ名をｸﾘｯｸして<OK>をｸﾘｯｸすればよい。
編集画面(図６)で<CE-DET>を押せばUV-DETECTORの画面になる(図８)。ここでは波長、calibration、ﾃﾞｰﾀの終了時間等が設定できる。
編集画面(図６)で<CE-BASE>を押せば本体の設定の画面になる(図９)。ここではpre-rinse、本体の温度、時間、電圧又は圧力の設定が出来る。
なお電圧は３０ＫＶが機械の設定上の上限だそうである。しかし(電源ｺｰﾄﾞを蛸足配線しているせいで？、)２０ＫＶ以上は圧を上げられないようだ。あまり高い電圧だと電圧が安定しないので、実際は１０ＫＶぐらいで良いようだ。
設定が終われば必ず名前を確認し、変更が必要なら変更してsaveしておく。ﾒｿｯﾄﾞ編集画面(図６)から<Selection>→<Save
Method(名前を変えずsave) or Save Method as ...(名前を変えてsave>をｸﾘｯｸして行う。
ﾒｿｯﾄﾞ編集が終われば、ﾒｿｯﾄﾞ編集画面(図６)から右ﾎﾞﾀﾝをｸﾘｯｸしてｸﾛﾏﾄｸﾞﾗﾌ画面(図２)に戻る。
[11.] (EDIT SAMPLE TABLE)ﾌﾟﾛｸﾞﾗﾑを組む。
ｸﾛﾏﾄｸﾞﾗﾌの画面(図２)から、<System2>→<Edit Sample Table>でｻﾝﾌﾟﾙﾃｰﾌﾞﾙ編集の画面になる(図１０)。
ここではｻﾝﾌﾟﾙvialの何番から何番までをどのﾒｿｯﾄﾞでassayするかを設定する。
忘れずにﾌﾟﾛｸﾞﾗﾑを組んだ後<Run from Line>で何行目から何行目まで走らせるか指定する。(ここを間違えると途中でﾌﾟﾛｸﾞﾗﾑが止まってしまう事になる。)
設定が終われば<Operations>→<Save Sample Table>でｻﾝﾌﾟﾙﾃｰﾌﾞﾙをsaveしておく。その後ﾏｳｽの右ﾎﾞﾀﾝでｸﾛﾏﾄｸﾞﾗﾌ画面(図２)に戻る。
[12.] ﾌﾟﾛｸﾞﾗﾑを走らせる。
ｸﾛﾏﾄｸﾞﾗﾌ画面(図２)から<System2>→<CONTROL SAMPLE TABLE>で<START>が黒くなっていれば<OK>をｸﾘｯｸする。
なおCAPILLARYにはKV単位の高圧がかけられているため、途中で透明のﾌﾟﾗｽﾁｯｸのｹｰｽを上げてしまうと安全の為にﾌﾟﾛｸﾞﾗﾑが停止して電圧がかからなくなるので、途中でｹｰｽを開けたりしないこと。
[13.] (自動印刷上の注意)ﾌﾟﾘﾝﾀｰが連続紙であるが、時々絡まってしまうことがある。ASSAYの途中で帰宅するときは、紙の先端にｸﾘｯﾌﾟでWEIGHTをかけると絡みにくくなる。
[14.] assay後何日間か使わない場合は、終わったらcapillary tubeを最後に空ｱﾝﾌﾟﾙでﾘﾝｽし中の液を抜いておくとcapillaryをつまらせないですむ。
[15.] 最後にUVﾗﾝﾌﾟをoffとし、[remove cartridge]ﾎﾞﾀﾝを押し冷却用のﾌﾛﾝをﾎﾞﾄﾙに戻し、電源を切る。
[16.] 終了後にSample Vialをsonicaterでよく洗う。扱うｻﾝﾌﾟﾙ量がnl単位なので洗浄はしっかり行ってください。
キャピラリー電気泳動（図）
第二生化マニュアル目次