第二生化マニュアル目次
白血球の調整では、多くの場合、混入している赤血球を除く必要があります。いろいろな方法が知られているが、以下の方法は白血球のダメージも少なく、サイトカイン産性作用の解析、FACS 解析にも良好な結果が得れれるので一度ためしてみてください。
[材料/ 器具]
(1)lysis buffer(x10 conc.)
(2)PBS(4℃に冷えている方がよい。 2mM EDTAをいれてもよい。)
[方法/コツ]
(1)MilliQでlysis bufferを10培に希釈する(108個以下の細胞ならば10mlで充分)。
(2)細胞を遠心(1000rpm,5min.4℃)する。
(3)上清をすてよくタッピング*する。
(4)108個以下の細胞ならば10mlのbuffer中でよく撹拌する。
(5)遠心(1000rpm,5min.4℃)する。
(6)上清をすて、PBS等にて細胞を再度懸濁する。
(7)遠心(1000rpm,5min.4℃)する。
(8)上清をすて、もう一度細胞を洗浄する。
(9)沈澱が白血球である。
[注意点]
*:よくタッピングしないと、細胞が凝集してしまうことがある。
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